Лекарственный Препарат Колба

Препараты из колб

Варианты ответов к сканвордам и кроссвордам

Варианты ответов к сканвордам и кроссвордам

ОФС.1.5.3.0006.15 Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах

Содержимое (Table of Contents)

ОФС.1.5.3.0006.15 Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Взамен ст. ГФ ХI

Требования настоящей общей фармакопейной статьи распространяются на лекарственное растительное сырье и лекарственные растительные препараты, которые в последующем используются для получения экстракционных лекарственных форм (настои, отвары, экстракты и т.д.), а также в случае отсутствия в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации метода количественного определения действующих биологически активных веществ.

Показатель «экстрактивные вещества» характеризует содержание в лекарственном растительном сырье/препарате всей суммы биологически активных и балластных веществ, извлекаемых экстрагентом. Тип экстрагента приводится в фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат в зависимости от его последующего назначения.

Определение содержания экстрактивных веществ проводят гравиметрически одним из описанных ниже методов. Метод 1 используется для определения содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах, которые в последующем подвергаются процессу однократной экстракции. Метод 2 используется для определения содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах, которые в последующем подвергаются многократной обработке одним и тем же экстрагентом. Метод 3 используется для определения содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах, которые в последующем подвергаются последовательной обработке различными экстрагентами. При отсутствии соответствующих указаний в фармакопейной статье или нормативной документации используют метод 1.

Метод 1. Однократная экстракция

Около 1 г (точная навеска) измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, просеянного сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 200 — 250 мл, прибавляют 50 мл растворителя, указанного в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат, колбу закрывают пробкой, взвешивают (с погрешностью ±0,01 г) и оставляют на 1 ч. Затем колбу соединяют с обратным холодильником, нагревают, поддерживая слабое кипение в течение 2 ч. После охлаждения колбу с содержимым вновь закрывают той же пробкой и взвешивают. Потерю в массе содержимого колбы восполняют тем же растворителем. Содержимое колбы тщательно взбалтывают и фильтруют через сухой бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150 — 200 мл. 25,0 мл полученного фильтрата пипеткой переносят в предварительно высушенную при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы и точно взвешенную фарфоровую чашку диаметром 7 — 9 см и выпаривают содержимое на водяной бане досуха. Чашку с сухим остатком сушат при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы, охлаждают в течение 30 мин в эксикаторе, на дне которого находится кальция хлорид безводный, и немедленно взвешивают.

Содержание экстрактивных веществ в абсолютно сухом лекарственном растительном сырье/препарате в процентах (X) вычисляют по формуле:

m — масса сухого остатка, г;

а — навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г;

V – объем экстрагента, используемый при однократной обработке лекарственного растительного сырья/препарата, мл,

W — влажность лекарственного растительного сырья/препарата, %.

Примечание. Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье/препарате, содержащем полисахариды, проводят методом холодного настаивания в соответствии с ОФС «Настои и отвары».

Метод 2. Многократная экстракция

(предполагает последовательную обработку сырья одним и тем же экстрагентом с последующим получением суммарного экстракта)

Около 1 г (точная навеска) измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, просеянного сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 200 — 250 мл, прибавляют 50 мл растворителя, указанного в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат, колбу закрывают пробкой, взвешивают с погрешностью ± 0,01 г и оставляют на 1 ч. Затем колбу соединяют с обратным холодильником, нагревают на водяной бане, поддерживая слабое кипение в течение 2 ч. После охлаждения колбу с содержимым вновь закрывают той же пробкой, взвешивают и потерю в массе восполняют растворителем. Содержимое колбы тщательно взбалтывают и фильтруют через сухой бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150 — 200 мл. Фильтр с навеской снова помещают в исходную колбу и повторяют эту процедуру в соответствии с количеством экстракций сырья, необходимом при получении экстракта (2-, 3- и более кратном), каждый раз прибавляя фильтрат в ту же колбу. 25,0 мл объединенного фильтрата пипеткой переносят в предварительно высушенную при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы в точно взвешенную фарфоровую чашку диаметром 7 — 9 см и выпаривают на водяной бане досуха. Чашку с сухим остатком сушат при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы, затем охлаждают в течение 30 мин в эксикаторе, на дне которого находится кальция хлорид безводный, и снова взвешивают.

Содержание экстрактивных веществ в абсолютно сухом лекарственном растительном сырье/препарате в процентах (Х) вычисляют по формуле:

m — масса сухого остатка, г;

а — навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г;

W — влажность лекарственного растительного сырья/препарата, %,

n – число экстракций;

V – объем экстрагента, используемый при однократной обработке лекарственного растительного сырья/препарата, мл.

Метод 3. Последовательная экстракция

(предполагает последовательную обработку сырья различными экстрагентами с определением содержания экстрактивных веществ в каждой фракции)

Около 1 г (точная навеска) измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, просеянного сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 200 — 250 мл, прибавляют 50 мл растворителя, указанного в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат, взвешивают и оставляют на 1 ч. Затем колбу соединяют с обратным холодильником и нагревают, поддерживая слабое кипение в течение 2 ч. После охлаждения потерю в массе содержимого колбы восполняют тем же растворителем. Содержимое колбы взбалтывают и фильтруют через бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150 — 200 мл. Фильтр с навеской помещают в чистую колбу и воспроизводят процедуру с растворителем, указанным в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат, фильтруя каждый раз в новые колбы. Из каждой полученной фракции 25,0 мл фильтрата пипеткой переносят в отдельные фарфоровые чашки и выпаривают извлечения на водяной бане досуха. Сухие остатки высушивают до постоянной массы и снова взвешивают.

Содержание экстрактивных веществ в каждой фракции в абсолютно сухом лекарственном растительном сырье/препарате в процентах (Х) вычисляют по формуле:

m — масса сухого остатка, г;

а — навеска лекарственного растительного сырья/препарата, г;

W — влажность лекарственного растительного сырья/препарата, %,

V – объем экстрагента, используемый при однократной обработке лекарственного растительного сырья/препарата, мл.

Около 1 г (точная навеска) измельченного лекарственного растительного сырья/препарата, просеянного сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 200 — 250 мл, прибавляют 50 мл растворителя, указанного в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат, взвешивают и оставляют на 1 ч. Затем колбу соединяют с обратным холодильником и нагревают, поддерживая слабое кипение в течение 2 ч. После охлаждения потерю в массе содержимого колбы восполняют тем же растворителем. Содержимое колбы взбалтывают и фильтруют через бумажный фильтр в сухую колбу вместимостью 150 — 200 мл. Фильтр с навеской помещают в чистую колбу и воспроизводят процедуру с растворителем, указанным в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации на лекарственное растительное сырье/препарат, фильтруя каждый раз в новые колбы. Из каждой полученной фракции 25,0 мл фильтрата пипеткой переносят в отдельные фарфоровые чашки и выпаривают извлечения на водяной бане досуха. Сухие остатки высушивают до постоянной массы и снова взвешивают.

Эта многолетняя трава относится к семейству луковых. Растение имеет целый ряд других народных названий: еврейский лук, мышиный чеснок, медвежий лук, дикий чеснок. Однако чаще всего его именуют черемшой. Выглядит растение как луковица с продолговатыми ланцетовидными листьями. По незнанию его можно перепутать с ландышем. Визуально эти два лесные жителя очень похожи. Только черемшу отличает стойкий чесночный запах.

Луковица ее достигает 10 миллиметров в поперечнике. Вырасти черемша может до полуметра. Цветет она в мае-июле. Поскольку растение однодомное, то цветки его обоеполые. Их соцветие — белый полушаровидный зонтик. В июле формируется плод, который представляет собой трехгранную коробочку с семенами черного цвета. Ареал произрастания лекарственного растения широк. Оно есть практически повсеместно на влажных почвах в лесах, в зонах водоемов, на лугах во всей Европе, на Кавказе, на Украине, почти на всей территории России за исключением Урала и крайнего севера.

Традиционно много употребляется в пищу черемши на территории Сибири. Там она используется в виде ранней зелени, насыщенной большим количеством витаминов, что весьма актуально в период весеннего авитаминоза.

Заготовка и хранение

Для дальнейшего использования колбы в лекарственных целях ее части заготовляют в разные периоды. Листья со стеблями, то есть надземная часть, срезаются на протяжении апреля-мая. Луковица заготовляется лишь после вызревания семян. Для длительного сохранения целебного сырья его солят либо маринуют. Но лучшим способом заготовки является заморозка или сушка. Необходимо надземную часть черемши разложить тонким слоем под навесом, можно это делать на чердаках. Перемешивать сырье время от времени нужно обязательно. При высушивании колба утрачивает свой специфический чесночный аромат. Хранят целебное готовое сырье в картонной коробке, полотняном мешке. В сухом помещении оно сберегается до следующего урожая.

Применение в быту

Колба по вкусу и запаху напоминает чеснок, поэтому она применяется на бытовом уровне, как и этот овощ. При этом надо учитывать, что подвергать ее тепловой обработке не стоит. Так разрушаются витамины и другие активные вещества в ее составе. Черемшу добавляют в весенние салаты, едят вприкуску с борщами, гарнирами. Хозяйки добавляют ее в готовые блюда в самом конце, чтобы сохранился аромат и вкус. Прекрасно сочетается колба с мясом, овощами, рисом, другой зеленью. При ее применении в пищу в большом количестве можно испортить вкус блюд.

Состав и лечебные свойства

Целебное растение чрезвычайно богато полезными веществами. В составе надземной части присутствует много эфирного масла, аскорбиновой кислоты, гликозидов. Вещество аллиин в листьях придает растению специфический чесночный запах. В луковице содержатся фитонциды, витамин С (в листьях его гораздо больше), минеральные соли, лизоцим, каротин, фруктоза.

Официальная медицина применяет фармакологические препараты, которые делают на основе колбы. «Урзаллин», например, представляет собой мазь, изготовленную с использованием эфирного масла черемши. Его назначают пациентам при гноящихся ранах, пролежнях, трофических язвах. Лекарство «Урзал» на базе этого растения используют для лечения трихомонадного кольпита.

Народные врачеватели советуют употреблять колбу пациентам с ослабленным выделением желудочного сока. Она при регулярном использовании в пищу повышает аппетит, улучшает перистальтику кишечника. Активные вещества в составе черемши подавляют патогенную микрофлору, восстанавливают здоровую.

Лекарства на основе колбы нередко применяются для стимуляции сердечной деятельности, нормализации метаболизма, кровяного давления. Такие препараты приводят к замедлению сердцебиения, увеличивая амплитуду сокращений миокарда. Лекарственные препараты на основе черемши выступают в качестве профилактики атеросклероза, поскольку регулируют уровень холестерина в крови. Высокое содержание в листьях черемши фитонцидов позволяет применять ее для борьбы с глистами и другими паразитами, болезнетворными микробами.

Насыщенность лекарственного растения витамином С, фитонцидами дает отличный эффект в терапии простудных заболеваний, особенно бронхитов. Применяется черемша и наружно. Лечат с ее помощью гноящиеся раны, трихомонадные кольпиты, грибковые заболевания, гнездовой лишай, травмы кожи.

Применение черемши в народной медицине: рецепты

Еще в древнем Риме знали о целебности этого растения и активно его использовали. Тогда колба чаще применялась для наружного лечения повреждений и травм кожи. Со временем ее начали использовать для терапии ревматизма, подагры, радикулитов. Уже тогда с помощью колбы выводили глисты из организма обычным частым употреблением ее в пищу.

Предлагаем воспользоваться рецептами народных врачевателей, чтобы на личном опыте убедиться в целебной силе черемши:

1. Свежевыжатый сок растения для лечения нарушений пищеварительных процессов и воспалений ротовой полости. Для этого необходимо промыть свежие листики колбы, отжать сок, предварительно пропустив их через мясорубку. При наличии проблем с пищеварительным трактом рекомендуется этот сок употреблять по столовой ложке перед каждым приемом пищи. Максимальная порция сока в сутки составляет четыре ложки. Длительность курса лечения пищеварения черемшой — 14 дней. Если речь идет о воспалительных процессах в ротовой полости, то надо развести в равных количествах сок и спирт, столовую ложку раствора добавить в стакан теплой воды, полоскать рот несколько раз в сутки. Продолжительность терапии зависит от состояния зубов и десен.
2. Лечение гнойного отита. Для этого применяется сок черемши. Его надо закапывать пипеткой по две капельки в слуховой проход и закрывать ухо ваткой. Через 20 минут его промывают теплой водой. Лечение отита состоит из двух подобных манипуляций в день.

Противопоказания к применению

Польза колбы для организма неоспорима, если употреблять препараты на ее основе строго в указанных дозировках. Их превышение чревато болями в желудке, головокружением, диареей. Если вы вводите в рацион черемшу весной для пополнения запаса витаминов, то 100 граммов в день будет вполне достаточно.

Запрещается употреблять лекарственное растение при наличии хронических болезней пищеварительного тракта, поджелудочной железы, желчного пузыря. Необходимо учесть возможность индивидуальной непереносимости колбы. Не рекомендуется ее использовать кормящим женщинам и будущим матерям.

Польза колбы для организма неоспорима, если употреблять препараты на ее основе строго в указанных дозировках. Их превышение чревато болями в желудке, головокружением, диареей. Если вы вводите в рацион черемшу весной для пополнения запаса витаминов, то 100 граммов в день будет вполне достаточно.

Колбам – новый препарат для лечения нарушений синтеза желчных кислот

FDA одобрило препарат Колбам/Cholbam (холевая кислота) в форме капсул, первое лекарственное средство для взрослых и детей с нарушением синтеза желчных кислот, связанным с одиночной энзимопатией, а также для пациентов с пероксисомными заболеваниями (включая синдром Зельвегера).

Для пациентов с этими редкими наследственными метаболическими заболеваниями характерны симптомы болезни печени, стеотарея (повышенное выведение жиров из организма с калом) и осложнения, связанные с усвоением жирорастворимых витаминов.

Больные испытывают нехватку энзимов, необходимых для синтеза холевой кислоты, первичной желчной кислоты, образующейся в печени при окислении холестерина. Недостаток холевой кислоты в организме приводит к снижению выделения желчи, скапливанию потенциально токсичных промежуточных продуктов желчной кислоты в печени (холестаз), и пониженному всасыванию жиров и жирорастворимых витаминов из рациона. Без надлежащего лечения пациенты перестают расти, а также могут развиться опасные для жизни повреждения печени

Колбам одобрен в качестве перорального препарата для детей от трех недель и взрослых. Колбам утвержден по программе приоритетного рассмотрения как средство для лечения редкого детского заболевания.

«Одобрение препарата подчеркивает обязанность FDA обеспечивать доступность лечения пациентов с редкими заболеваниями», – утверждает Джули Байтс, директор Отдела по оценке препаратов III в Центре по оценке и исследованию лекарственных средств FDA. «До сегодняшнего дня не существовало утвержденного лечения редкого нарушения синтеза желчных кислот».

Эффективность Колбама оценивалась в несравнительном клиническом исследовании с участием 50 пациентов, проходивших лечение в течение более 18-и лет. Продленный курс лечения включал 21 из них и 12 дополнительных участников. Доступны предварительные данные эффективности за дополнительный 21 месяц. Средний возраст пациентов, начавших лечение холевой кислотой, составлял 4 года (от 3 недель до 36 лет). Ответ на лечение оценивался по улучшению анализов на функции печени, а также показателей веса, по сравнению с исходными. Ответ на лечение испытали 64 % пациентов, чьи данные были доступны. Выживаемость двух третей пациентов составила более 3 лет. Литературные данные также подтверждает эффективность Колбама.

Эффективность Колбама в лечении пероксисомальных заболеваний, включая синдром Зельвегера, оценивалась в несравнительном клиническом исследовании с участием 29 пациентов, проходивших лечение в течение 18 лет. Продленный курс лечения включал 10 из них и 2 дополнительных участника. Доступны предварительные данные эффективности за дополнительный 21 месяц. Большинству пациентов на момент начала лечения холевой кислотой было менее 2 лет (от 3 недель до 10 лет). Ответ на лечения оценивался по улучшению анализов функции печени, а также показателей веса по сравнению с исходными. Ответ на лечение испытали 46 % пациентов, чьи данные были доступны. Выживаемость 42 % пациентов составила более 3 лет.

Эффективность Колбама для лечения других симптомов нарушения синтеза фолиевой кислоты в связи с одиночной энзимопатией или пероксисомными заболеваниями, например, неврологических проявлений, пока не установлена.

Наиболее распространенным побочным эффектом препарата является диарея. Лечение Колбамом должно осуществляться под строгим надзором квалифицированного врача – гепатолога или детского гастроэнтеролога. Лечение должно быть немедленно прекращено при ухудшении функций печени.

Наблюдательное исследование для оценки продолжительной безопасности Колбама будет проведено уже после регистрации препарат.

Колбам выпускается компанией Baltimore, дочерним предприятием Asklepion Pharmaceuticals в Мэриленде.

Эффективность Колбама в лечении пероксисомальных заболеваний, включая синдром Зельвегера, оценивалась в несравнительном клиническом исследовании с участием 29 пациентов, проходивших лечение в течение 18 лет. Продленный курс лечения включал 10 из них и 2 дополнительных участника. Доступны предварительные данные эффективности за дополнительный 21 месяц. Большинству пациентов на момент начала лечения холевой кислотой было менее 2 лет (от 3 недель до 10 лет). Ответ на лечения оценивался по улучшению анализов функции печени, а также показателей веса по сравнению с исходными. Ответ на лечение испытали 46 % пациентов, чьи данные были доступны. Выживаемость 42 % пациентов составила более 3 лет.

ИССЛЕДОВАНИЕ ЗАВОДСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ НА СТЕРИЛЬНОСТЬ

Стерильность лекарственных средств достигается соблюдением необходимых санитарно-гигиенических условий их изготовления и режима стерилизации.

Препараты, стерилизуемые в процессе их приготовления, исследуются на стерильность. С этой целью в стерильных лекарственных препаратах определяется наличие микроорганизмов, а также дрожжевых и плесневых грибов.

Количество испытуемого препарата для посева зависит от объема содержимого одной единицы лекарственной формы и регламентировано ГФ XI и представлено в таблице 4.

Во избежание неправильной оценки результатов анализа на стерильность, необходимо однократно определить наличие антимикробного действия лекарственного препарата. Для этого в 2 пробирки с тиогликолевой средой и в 2 пробирки с жидкой средой Сабуро добавляют соответствующее количество (табл. 4) испытуемого лекарственного препарата и в каждую пробирку вносят по 0,1 мл микробной взвеси тест-штамма, содержащего 1000 клеток в 1 мл. Посевы в тиогликолевой среде инкубируют при температуре от 30 до 35°С в течение 48 ч, а на среде Сабуро – при температуре от 20 до 25°С в течение 72 ч. Контролем служат пробирки с питательной средой, в которые вместо данного лекарственного средства вносят аналогичное количество стерильной дистиллированной воды. В качестве тест-культуры микроорганизмов используют штаммы, рекомендованные ГФ-XI: Staphylococcus aureus ATCC 6538P; Bacillus subtilis ATCC 6633; Escherihia coli ATCC 25922; Candida albicans ATCC-885-653.

При отсутствии антимикробного действия исследуемого препарата в пробирках будет наблюдаться рост микроорганизмов тест-культур. При наличии антимикробного действия рост микроорганизмов будет отсутствовать.

Если исследуемый препарат характеризуется антимикробным действием, то для его нейтрализации используют инактиваторы, например: пенициллиназу для пенициллинов и цефалоспоринов, пара-аминобензойную кислоту для сульфаниламидов и др. При отсутствии инактиватора возможно увеличение разведения препарата в питательной среде, для этого берут 1 мл испытуемой лекарственной формы и увеличивают объем питательной среды до 250 мл.

Для определения стерильности применяют метод прямого посева исследуемого лекарственного препарата на питательные среды.

Для выявления бактерий посев лекарственного препарата проводят на тиогликолевую среду, для определения грибов на жидкую среду Сабуро в объемах, указанных в таблице 4.

При исследовании мазей и растворов лекарственных средств в маслах отбирают асептически по 0,1 г (мл) от каждой единицы отобранной для исследования лекарственной формы и вносят в стерильную колбу, содержащую стерильные стеклянные бусы, 100 мл 1 мол. фосфатного буферного раствора (рН 6,8-7,0) и эмульгатор. Выбор эмульгатора и его количество зависят от природы мази и растворов лекарственных средств в маслах. Наиболее что применяют твин-80 в концентрации до 2,5 %, не оказывающий антимикробного действия. При испытании мазей, легко эмульгируемых в воде, эмульгатор в буферный раствор не вносят. Содержимое колбы подогревают до температуры 40 о С и встряхивают не более 30 мин до получения однородной эмульсии. Полученную эмульсию в количестве по 5 мл засевают в колбу с 40 мл тиогликолевой среды для выявления бактерий и в колбу с 40 мл жидкой среды Сабуро для выявления грибов.

Посевы на тиогликолевой среде инкубируют при температуре от 30 до 35°С 14 сут, а в среде Сабуро при температуре 20 – 25°С тоже количество времени.

При определении стерильности лекарственных средств, обладающих выраженным антимикробным действием, лекарственных средств, разлитых в емкости более 100 мл, а также при испытании мазей и растворов в маслах предпочтительнее использовать метод мембранной фильтрации. Для этого от каждой серии, независимо от ее объема, отбирают 30 емкостей, которые делят на 3 группы по 10 емкостей. Емкости 2 групп (20 штук) используют для испытания на стерильность, третьей группы (10 штук) – для контроля полноты отмывания мембраны от лекарственного средства. Исследование проводят с использованием фильтрационной установки, включающей фильтродержатель, соединенный с колбой приемником. На фильтродержатель помещают мембрану с размером пор 0,45 + 0,02 мкм.

Допускается использование аппарата, представляющего стерильную замкнутую систему и работающую по принципу фильтрации растворов. Фильтрационную установку в собранном виде стерилизуют в автоклаве при 121+1 о С. Стерилизацию можно осуществлять и другим методом, обеспечивающим сохранность рабочих характеристик мембран, а также стерильность установки (ионизирующее излучение, окись этилена и др.).

Испытуемое лекарственное средство при необходимости растворяют или суспендируют в растворителе не подавляющем рост микроорганизмов, например, растворе натрия хлорида 0,9%. Растворитель перед использованием необходимо профильтровать через мембраны с порами размером 0,45+0,02 мкм. Фильтрование отобранных образцов проводят в асептических условиях под вакуумом при скорости протекания воды 55-75 мл в 1 мин. При испытании лекарственных средств с антимикробным действием или содержащих консервант после окончания фильтрации мембрану необходимо промыть 3-5 порциями по 100 мл соответствующего растворителя. После отмывания мембраны ее извлекают, разрезают стерильными ножницами пополам и одну половину помещают в колбу со 100 мл тиогликолевой среды, вторую – в колбу со 100 мл среды Сабуро. Посевы на тиогликолевой среде инкубируют при температуре от 30 до 35°С 14 сут, а в среде Сабуро при температуре 20 – 25°С тоже количество времени. При испытании мазей и растворов лекарственных средств в маслах от каждой из 20 емкостей отбирают по 100 мг препарата в колбу со 100 мл растворителя (изопропилмиристат и др), который предварительно подогревают до 45 о С . Встряхивают и фильтруют через мембраны с размером пор 0,22+0,02мкм измерения. После фильтрации образца мембрану промывают 2 порциями по 200 мл жидкости (пептон — 5 г, твин -80 — 10 г, воды дистиллированной до 1000 мл, рН после стерилизации 7,1+0,2). После отмывания мембраны ее извлекают, разрезают стерильными ножницами пополам и одну половину помещают в колбу со 100мл тиогликолевой среды, вторую – в колбу со 100 мл среды Сабуро. Посевы на тиогликолевой среде инкубируют при температуре от 30 до 35°С 14 сут, а в среде Сабуро при температуре 20 – 25°С тоже количество времени. При испытании лекарственных средств, имеющих вязкую консистенцию или медленно фильтрующихся суспензий, необходимо предварительно добавить растворитель, указанный в частной статье, для увеличения скорости фильтрации.

Контроль полноты отмывания фильтра (третья группа емкостей) проводят следующим образом: после фильтрации и отмывания мембраны ее извлекают , разрезают стерильными ножницами пополам и одну половину помещают в колбу со 100 мл тиогликолевой среды и суточной культуры золотистого стафилококка АТСС 6538 Р из расчета 100 микробных клеток на весь объем среды, вторую – в колбу со 100 мл среды Сабуро и 48 часовой культурой Candida albicans АТСС 885-653 из расчета 100 микробных тел на весь объем питательной среды. . Посевы на тиогликолевой среде инкубируют при температуре от 30 до 35°С48-72 ч, а в среде Сабуро при температуре 20 – 25°С тоже количество времени. Наличие роста тест культур микробов свидетельствуют о достаточной полноте отмывания мембран от антимикробного лекарственного средства.

Учет и интерпретация результатов.

Посевы просматривают в рассеянном свете ежедневно и по окончании времени инкубации делают окончательное заключение. Наличие роста бактерий и грибов в питательных средах оценивают визуально по появлению мутности, осадка, поверхностно расположенной пленки, пристеночного роста и другим макроскопическим изменениям. При изменении питательной среды наличие в ней микроорганизмов необходимо подтвердить микроскопированием мазков, приготовленных из посевов и окрашенных по Граму.

Препарат считают стерильным при отсутствии роста бактерий и грибов, т.е. если в среде отсутствуют видимые изменения.

При обнаружении роста испытание повторяют на таком же количестве образцов, как и в первый раз.

При отсутствии роста микроорганизмов при повторном посеве препарат считают удовлетворяющим требованию испытания на стерильность. В случае роста микроорганизмов при повторном посеве, морфологически сходных с микроорганизмами, выявленными в первичном посеве, испытуемый препарат считают нестерильным.

Если при повторном посеве наблюдается рост микроорганизмов, отличающихся по морфологии от первоначально выделенных, испытание повторяют в третий раз на удвоенном количестве образцов. При отсутствии роста микроорганизмов в третьем испытании препарат считают удовлетворяющим требованиям на стерильность. При наличии роста микроорганизмов хотя бы в одной пробе в третьем испытании препарат считают нестерильным.

Состав питательных сред

Для контроля стерильности применяют «Сухую питательную среду для контроля стерильности» и жидкую среду Сабуро.

Вместо коммерческой среды можно использовать тиогликолевую среду индивидуального приготовления, имеющую следующий состав:

рН после стерилизации 7,0 ± 0,2

Тиогликолевая среда пригодна к употреблению в течение 14 дней со дня приготовления и хранить её необходимо при температуре от 10 до 25°С в защищенном от света месте. Если при хранении среды, содержащей резазурин, её верхний слой ( более 1/3 объема) окрасится в розовый цвет, среду можно регенерировать нагреванием на кипящей водяной бане в течение 10 – 15 мин до исчезновения розовой окраски с последующим быстрым охлаждением. В случае если окраска не исчезает после нагревания, среду считают непригодной к употреблению. Регенерацию среды можно проводить только один раз.

Жидкая среда Сабуро:

рН после стерилизации 5,6 ± 0,2.

Тиогликолевую среду и среду Сабуро стерилизуют насыщенным паром при избыточном давлении в автоклаве 0,11 ± 0,02 МПа (1,1 ± 0,2 кгс/см 2 ) при температуре 121 ± 1°С в течение 15 мин.

Требования к ростовым качествам питательных сред

Тиогликолевая среда и среда Сабуро должны обеспечивать визуально обнаруживаемый рост соответствующих тест-штаммов аэробных и анаэробных бактерий и грибов.

Питательные среды должны обеспечивать рост микроорганизмов при посеве их в количестве менее 100 жизнеспособных клеток: для тиогликолевой среды – не позднее 48 ч инкубации при температуре от 30 до 35°С и для среды Сабуро – не позднее 72 ч инкубации при температуре от 20 до 25°С.

Испытание на пирогенность

Испытание проводят на здоровых кроликах обоего пола, не альбиносах, массой 2-3,5 кг, содержащихся на полноценном рационе. Каждый кролик должен находится в отдельной клетке в помещении с постоянной температурой. В течение недели, предшествующей опыту, кролики не должны терять в весе. Взвешивание животных проводят не менее 3 раз через день. В течение 3 сут перед испытанием у каждого кролика измеряют температуру. Измерения проводят ежедневно утром до дачи корма при помощи ртутного медицинского или электротермомометра с точностью до 0,1 о . Датчик термометра вводят в прямую кишку на глубину 7-9см за внутренний сфинктер на время, необходимое для достижения максимальной температуры. Исходная температура должна быть 38,5-39,5 о . Животные с более низкой или более высокой температурой для испытания не пригодны. Кроме того, кроликов, впервые предназначенных для испытания лекарственных средств, проверяют на реактивность путем внутривенного введения 10 мл 0,9 % стерильного непирогенного раствора натрия хлорида. В случаях изменения температуры у кроликов более чем на ±0,4 о животные считаются непригодными для опыта.

Если нет других указаний в частной Фармакопейной статье для испытаний отбирают не менее 2-х флаконов или ампул от каждой серии, содержащей от 1000 до 10000 флаконов или ампул. При количестве в серии более 10000 флаконов или ампул отбирают 3 единицы препарата, при количестве в серии менее 1000 единиц для анализа отбирают 1 флакон или ампулу. Содержимое отобранных флаконов или ампул смешивают и вводят в ушную вену 3 кроликам. Растворы испытуемых лекарственных средств подогретые до 37 о вводят в количествах предусмотренных соответствующими частными статьями. Лекарственное средство считаются непирогенными если сумма повышения температуры у 3 кроликов меньше или равна 1,4 о . Если сумма превышает 2,2 о , то препарат считают пирогенным. В случаях если сумма повышений температуры находится в пределах от 1,5 до 2,2 о С испытания проводят повторно на 5 кроликах и препарат считается непирогенным если сумма повышения температуры у всех 8 кроликов не превышает 3,7 о С. Если же сумма равна или превышает 3,8 о С лекарственное средство считают пирогенным.

В частной фармакопейной статье могут быть указаны другие пределы отклонения температуры.

Вместо коммерческой среды можно использовать тиогликолевую среду индивидуального приготовления, имеющую следующий состав: